А.А. Полозников, П.А. Савицкий, Д.М. Хушпулян, Т.А. Чубарь, И.Г. Газарян, В.И. Тишков

Получение и свойства мутантных форм пероксидазы табака с дополнительным остатком триптофана

Методом полимеразной цепной реакции получены мутантные формы пероксидазы табака (ТОР) Gln116Trp и Leu157Trp. Экспрессия этих мутантов была осуществлена путем клонирования в вектор pET40b и культивированием в штамме E. coli BL21(DE3) Codon Plus. Уровень экспрессии апобелка пероксидазы табака в выбранном штамме в обоих случаях составил более 40% общего белка. Процедура рефолдинга мутантных форм была проведена на основе известной методики рефолдинга рекомбинантной пероксидазы табака дикого типа. Выход реактивации мутантных форм пероксидазы табака составляет 3–9%, удельная активность по АБТС – 2000–3000 ед. активности на 1 мг белка. Изучены зависимости скорости окисления АБТС перекисью водорода от концентрации субстратов. Показано, что данная реакция, катализируемая мутантными формами, протекает по механизму типа “пинг-понг”, однако удельная активность по различным субстратам у Gln116Trp и Leu157Trp серьезно различается. Таким образом, можно сделать предположение, что остатки триптофана выступают в роли элемента в цепи передачи заряда между активным центром фермента и субстратом.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2006, том 47, № 1, стр. 20-24