Д.А. Гудков, И.В. Лягин, В.В. Верхуша, Е.Н. Ефременко

Новые гибридные белки с активностью органофосфатгидролазы и флуоресценцией белка deGFP4

Разработаны новые генетические конструкции, кодирующие синтез гибридных белков, обладающих органофосфатгидролазной активностью и свойствами аналога зеленого флуоресцентного белка с pH-чувствительной флуоресценцией. Установлено, что для получения максимального выхода гибридных белков в растворимой активной форме в клетках E. сoli необходимо 0,1 мМ индуктора биосинтеза и 10 ч культивирования после индукции синтеза белков. Достигнутый уровень синтеза одного из новых белков в растворимой активной форме оказался в 2–25 раз выше выходов в растворимой форме гибридных белков-аналогов, известных из литературы. Установлено, что органофосфатгидролаза в составе гибридных белков обладает характеристиками (рН-оптимум действия, термостабильность, субстратная специфичность и каталитическая эффективность действия), отличными от соответствующих характеристик, известных для нативного фермента. Показано, что флуоресценция зеленого флуоресцентного белка, находящегося в составе гибридных белков, зависит от pH среды аналогично индивидуальному белку. На примере одного из гибридных белков показана взаимозависимость его флуоресцентных характеристик и OPH-активности, проявляющейся в реакциях гидролиза фосфорорганических соединений.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2011, том 52, № 2, стр. 113-121