Одинцева Е.Р., Попова А.С., Рожкова А.М., Тишков В.И.
Роль остатков цистеина в стабильности бактериальной
формиатдегидрогеназы
Реферат
NAD+-зависимая
формиатдегидрогеназа (ФДГ; КФ1.2.1.2) из метилотрофных бактерий Pseudomonas
sp.101 (PseФДГ) обладает наиболее высокой термостабильностью среди всех
известных формиатдегидрогеназ, выделенных из различных источников. Инактивация
PseФДГ при температуре ниже 45° связана с окислением SH-групп фермента. Ранее
проведенные эксперименты по химической модификации SH-групп ФДГ показали
наличие двух остатков Cys, влияющих на каталитическую активность ФДГ. Анализ
трехмерной структуры фермента свидетельствует о том, что остатки Cys255 и
Cys354 расположены на поверхности белковой глобулы. Ранее было показано, что
мутации Cys255Ser и Cys255Met приводят к повышению химической стабильности ФДГ
более, чем в 100 раз, однако при этом термостабильность снижается в 3 и 10 раз
соответственно, и ухудшается сродство к NAD+. Полученный нами мутант
ФДГ Cys255Ala обладал такой же химической стабильностью, что и мутант Cys255Ser
с сохранением кинетических параметров нативной ФДГ. Ухудшение его термостабильности
было компенсировано введением дополнительных мутаций, повышающих стабильность
ФДГ при температурах выше 50°. В работе были также получены мутанты ФДГ
Cys354Ala, Cys354Ser, Cys354Met и изучены их свойства.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2002, том 43, № 6, стр. 356-359
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2002
|